La mayoría de los parásitos se localizan en algún momento de su ciclo biológico a nivel intestinal, por lo que el análisis coprológico es el más utilizado aunque también podemos encontrarlos en otros lugares como son la piel o la sangre. Además se utilizan métodos inmunológicos en los que atenderemos a las modificaciones que provocan los parásitos en el sistema inmunitario.
Fundamento del análisis cropológico
Los análisis coprológicos son métodos utilizados para encontrar e identificar tanto parásitos adultos como sus formas parasitarias en las heces dado que un gran número de parásitos pasan en algún momento de su ciclo biológico por el tracto digestivo.
En el material digestivo (heces y contenidos de las diversas porciones) podemos encontrar:
- Parásitos adultos: helmintos
- Partes de parásitos: proglotis de cestodos y formas parasitarias
- Formas vegetativas: protozoos
- Formas de transmisión: ooquistes, quistes, huevos, embriones, larvas
Existen diferentes tipos de métodos; si realizamos una breve historia clínica previa; podremos determinar cuales son los métodos que debemos utilizar en el análisis coprológico a realizar.
NO EXISTE UN ÚNICO MÉTODO QUE SIRVA PARA TODOS LOS PARÁSITOS.
Es importante tener en cuenta que un análisis negativo no indica que el animal no se encuentre parasitado; siendo sólo útil la realización de estos análisis, cuando los parásitos o sus formas parasitarias se eliminen por medio de las heces (el resultado sólo será positivo durante el período patente de la infección parasitaria). Igualmente, la detección de un parásito determinado en una analítica no implica que el animal sufra una enfermedad parasitaria. Toma de muestras
El método utilizado para la recogida de muestras varía dependiendo de la especie de la que se trate, en grandes animales las muestras deben recogerse directamente de recto; sin embargo en pequeños animales se recoge con la ayuda de una espátula procurando no tomar partes que hayan estado en contacto con el suelo para evitar contaminaciones.
La cantidad de muestra debe ser suficiente.
Colocación en recipientes apropiados Identificación de muestras
Transporte al laboratorio: si no se realiza análisis el mismo día, refrigerar las muestras.
Métodos
Análisis macroscópico:- Apreciar las características organolépticas de las heces: color, consistencia, existencia de estrías de sangre, moco, fibrina, etc.
- Preparar una suspensión de heces con agua en placa de Petri y observar a fondo claro y oscuro. Se podrán encontrar vermes adultos y/o proglotis de cestodos.
Análisis microscópico:
- Método directo: mezclar una pequeña cantidad de heces frescas (indicado en heces no sometidas a refrigeración) en un portaobjetos con unas gotas de agua. Apartar las partículas groseras, colocar un cubreobjetos y observar al M.O. Sólo es útil cuando hay una elevada eliminación de formas parasitarias en heces (esta técnica es más utilizada en la clínica de animales de compañía). Los trofozoítos de protozoos (x400) podrán observarse en movimiento. Para realizar estos métodos podemos utilizar distintos métodos tintoriales como azul de metileno en tampón acetato o lugol diluido.
- Métodos indirectos: su objetivo es conseguir una mayor concentración de formas parasitarias en el menor volumen posible. Para ello se utilizan tres protocolos distintos:
- 1. Flotación
- 2. Sedimentación
- 3. Migración
Flotación: se realiza una suspensión de heces en una solución con densidad mayor de 1. Las formas parasitarias de menor densidad que la solución utilizada se situarán en la superficie del líquido, separándose de gran cantidad de detritus fecales y facilitando su observación.Protocolo flotación simple:
- Diluir las heces
- Eliminar los elementos groseros
- La mezcla resultante se deja reposar un minuto
- Sobre la superficie depositamos un cubreobjetos
- Esperar 45’ y recoger el cubreobjetos verticalmente con un movimiento rápido para que no se caiga el LR con los parásitos y se deposita en un portaobjetos y se observa al microscopio óptico
La técnica de flotación más utilizada es el método de McMaster modificado, cuya solución de trabajo es la solución salina saturada. Permite evidenciar y cuantificar la cantidad de ooquistes, huevos de nematodos y de cestodos eliminados en las heces.
Con densidades superiores a 1.3 flotan casi todas o todas las formas parasitarias pero pueden presentar varios inconvenientes:
- Flotan también gran cantidad de partículas fecales.
- Si no se examina la muestra inmediatamente se pueden deformar algunas formas parasitarias, con la consiguiente dificultad en su identificación.
- El coste es más elevado.
- Algunas soluciones (iodomercuriato potásico) son muy corrosivas. 6
Sedimentación: en una suspensión de heces en agua, puesta en reposo, todas las formas parasitarias caen al fondo de la preparación. Se utiliza como método complementario de la flotación (McMaster modificado) para evidenciar los huevos de mayor densidad (Trematodos). El método más utilizado es la sedimentación lenta "en copa" aunque también se puede centrifugar en tubo de ensayo (para muestras muy pequeñas).
Migración: se utiliza para determinar la presencia de larvas en heces. Se basa en el carácter hidrófilo de las larvas por el cual abandonan la masa fecal cuando ésta se deposita en agua. Posteriormente se concentran por sedimentación según van agotándose las larvas en su deambular por el agua. El método de migración larvaria habitualmente utilizado es el método Baermann-Wetzel.
Explicación del método de Mac Master modificado
Se parte de una cantidad conocida de heces y de agua, dependiendo de la especie animal en este caso utilizamos heces de herbívoro y no de reptil, pero es aplicable igualmente a reptiles:
Protocolo:
- Pesar 3 / 4.5 g de heces.
- Disgregar las heces en un mortero o en un recipiente de plástico con perlas de vidrio y añadiendo 42 / 40.5 ml de agua. Agitar vigorosamente.
- Filtrar la emulsión por mallas (400 - 500 y 150 - 160 μm) o colador con gasa (doble capa).
- Recoger filtrado, homogeneizar y llenar un tubo de ensayo 10 ml.
- Centrifugar el tubo durante 3 minutos a 1500 rpm.
- Eliminar sobrenadante, agitar sedimento (agitador mecánico) y añadir solución salina saturada hasta el nivel anterior (10 ml).
- Homogeneizar el contenido y con ayuda de una pipeta Pasteur cargar las dos hemicámaras de una cámara de McMaster. Volumen de cada hemicámara = 0.5 ml (ambas hemicámaras 1 ml). Volumen de cada retícula = 0.15 ml (ambas retículas 0.3 ml).
- Observar las dos retículas de la cámara (0.3 ml) al M.O. y proceder a la cuantificación de formas parasitarias.
Procedimiento con fotos
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